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羟基乙酸的含量测定 高效液相色谱法
羟基乙酸的含量测定 高效液相色谱法
一、摘要
本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定客户样品中羟基乙酸的含量。色谱条件:C18 色谱柱(4.6×250mm,5μm),流速为0.8mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL,检测波长为218nm。实验结果:羟基乙酸的理论塔板数为9748;羟基乙酸的仪器检出限为0.002 mg/mL,仪器定量限为0.005 mg/mL;羟基乙酸在测定浓度范围内呈现良好的线性关系,确定系数R2>0.9999;样品1中羟基乙酸的含量为0.11mg/mL,样品2中羟基乙酸的含量为17.75mg/mL,样品3中羟基乙酸的含量为1.93mg/mL,样品4中羟基乙酸的含量为70.10mg/mL,样品5中未检出羟基乙酸。对样品5进行加标实验,加标回收率为97.5%。
二、实验过程
1 原理
羟基乙酸在218nm处有紫外吸收,使用高效液相色谱法测定,外标法定量。
2 试剂与材料
2.1水:符合GB/T 6682的一级水;
2.2甲醇(CH3OH):色谱纯;
2.3磷酸(H3PO4):色谱纯;
2.4磷酸水溶液(pH=3.00):量取1L水,用磷酸(2.3)调pH至3.00;
2.5溶剂:甲醇+磷酸水溶液(pH=3.00)=20+80,将10mL甲醇(2.2)与40mL磷酸水溶液(pH=3.00)(2.4)混合,摇匀备用;
2.6羟基乙酸标准品:客户提供;
2.7样品1~样品5;客户提供。
3 仪器与设备
3.1高效液相色谱仪:
具体配置包括:
Wooking K2025 P2二元高压输液泵(脱气机、四通道溶剂切换阀、自动在线清洗系统);
Wooking K2025 AS自动进样器(脱气组件、50μL定量环);
Wooking K2025 CO柱温箱(室温以下10℃至85℃);
Wooking K2025 UVD紫外-可见光检测器;
Wookinglab色谱工作站(中文版)。
3.2涡旋振荡器;
3.3超声波清洗机;
3.4 pH计:精确到0.01 pH单位。
4 测定步骤
4.1标准溶液配制
4.1.1标准储备液配制
称取一定量羟基乙酸标准品(2.6),用溶剂(2.5)溶解,配制成浓度为10mg/mL的标准储备液。
4.1.2标准系列溶液配制
分别取一定量的标准储备液,用溶剂(2.5)溶解,配制成浓度依次为0.1mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0mg/mL、2.0 mg/mL、5.0 mg/mL的标准系列溶液。
4.2色谱条件
a)色谱柱:ChromCore AQ C18 ,4.6×250mm,5μm;
b)流动相:甲醇(2.2)为流动相A,磷酸水溶液(pH=3.00)(2.4)为流动相B,等度洗脱:A:B=20:80;
c)进样量:10μL;
d)柱温:25℃;
e)检测器及波长:紫外-可见光检测器,波长设置为218nm。
5 样品测试结果
5.1 校准曲线
将标准系列溶液(4.1.2)由低浓度至高浓度注入高效液相色谱仪,按色谱条件(4.2)进行采集,得到不同浓度目标化合物的色谱图,记录保留时间和峰面积。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,建立校准曲线。羟基乙酸(浓度为1.0mg/mL)的标准色谱图见图1,积分结果见表1。羟基乙酸(浓度为0.1 mg/mL)的仪器灵敏度色谱图
5.2含量测定
分别取样品1~样品4适量,用溶剂(2.5)稀释10倍,待测;取样品5适量,用溶剂(2.5)配制成羟基乙酸含量为1.0mg/mL的样品测试液。将样品1~样品5测试液按色谱条件(4.2)进行测定,并对样品5做加标回收实验。空白溶液的色谱图、样品1~样品5的色谱图及样品5加标的色谱图
由羟基乙酸校准曲线计算样品1~样品5测试液及样品5加标测试液中羟基乙酸的含量
依据表3中数据计算可知,样品1中羟基乙酸的含量为0.11mg/mL,样品2中羟基乙酸的含量为17.75mg/mL,样品3中羟基乙酸的含量为1.93mg/mL,样品4中羟基乙酸的含量为70.10mg/mL,样品5中未检出羟基乙酸,样品5加标回收率为97.5%。
三、结论
本实验对客户提供的样品中的羟基乙酸的含量进行测定,结果表明:羟基乙酸的理论塔板数为9748;羟基乙酸的仪器检出限为0.002mg/mL,仪器定量限为0.005 mg/mL;羟基乙酸在测定浓度范围内呈现良好的线性关系,确定系数R2>0.9999;样品1中羟基乙酸的含量为0.11mg/mL,样品2中羟基乙酸的含量为17.75mg/mL,样品3中羟基乙酸的含量为1.93mg/mL,样品4中羟基乙酸的含量为70.10mg/mL,样品5中未检出羟基乙酸。对样品5进行加标实验,加标回收率为97.5%。